Thermo Fisher Scientific(賽默飛)的熱循環(huán)儀是一種用于進行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)的實驗室設(shè)備。以下是使用Thermo Fisher熱循環(huán)儀的具體方法和注意事項。

　　主要步驟

　　1. 準(zhǔn)備PCR反應(yīng)混合物

　　在無菌環(huán)境中將以下試劑按照PCR反應(yīng)體系的要求混合在PCR管中：

　　模板DNA

　　正向引物和反向引物

　　dNTPs(脫氧核苷三磷酸)

　　PCR緩沖液

　　MgCl2(如果緩沖液中不包含)

　　Taq DNA聚合酶或其他熱穩(wěn)定DNA聚合酶

　　無菌水

　　2. 設(shè)置PCR儀參數(shù)

　　根據(jù)實驗要求設(shè)置PCR儀的參數(shù)，包括：

　　初始變性：95℃，2-5分鐘

　　循環(huán)參數(shù)(通常30-40個循環(huán))：

　　變性：95℃，30秒

　　退火：50-65℃，30秒(根據(jù)引物的Tm值調(diào)整)

　　延伸：72℃，30秒-1分鐘(根據(jù)擴增片段的長度調(diào)整，每1000 bp需1分鐘)

　　最終延伸：72℃，5-10分鐘

　　保溫：4℃

　　3. 加載PCR反應(yīng)管

　　將準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管放入熱循環(huán)儀的模塊中，確保每個反應(yīng)管都放置牢固，避免接觸不良。

　　4. 啟動熱循環(huán)儀

　　選擇預(yù)設(shè)的程序或手動輸入上述設(shè)置，啟動PCR反應(yīng)。

　　5. 監(jiān)控和完成反應(yīng)

　　在PCR反應(yīng)進行過程中，監(jiān)控儀器運行情況。反應(yīng)完成后，熱循環(huán)儀會自動降溫到保溫溫度(通常為4℃)。

　　6. 分析PCR產(chǎn)物

　　反應(yīng)完成后，通過瓊脂糖凝膠電泳等方法進行PCR產(chǎn)物分析。

　　熱循環(huán)儀的型號

　　Thermo Fisher提供多種型號的熱循環(huán)儀，常見的有：

　　Applied Biosystems™ SimpliAmp™ Thermal Cycler

　　Applied Biosystems™ Veriti™ Thermal Cycler

　　Applied Biosystems™ ProFlex™ PCR System

　　使用注意事項

　　無菌操作：確保無菌環(huán)境，避免污染。

　　合理設(shè)置參數(shù)：根據(jù)實驗需求優(yōu)化退火溫度和循環(huán)次數(shù)。

　　試劑質(zhì)量：使用高質(zhì)量試劑，確保實驗結(jié)果的可靠性。

　　設(shè)備維護：定期校準(zhǔn)和維護熱循環(huán)儀，確保其正常運行。

　　通過以上步驟，你可以有效地使用Thermo Fisher熱循環(huán)儀進行PCR實驗。每個型號的具體操作界面和功能可能略有不同，建議參閱設(shè)備的操作手冊以獲取詳細(xì)信息和指導(dǎo)。